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文章来源:admin    时间:2019-06-23 23:00

  

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  这些组织碎片在室温下,在一个摇杆上,于4毫升的裂解溶液中培养45~60分钟,并用轻柔的吸移管(pipetting)弄碎大的组织碎片。此混合物通过两组细胞滤网(100和40毫米,BD公司产品),而裂解的细胞通过离心手段(250克,5分钟)收集。沉淀的细胞在磷酸盐缓冲液(PBS)中的4%福尔马林中固定30分钟,然后点在Superfrost Plus显微镜载玻片(FisherScientific公司产品)上,用抗体稀释液(PBSTx)渗透化30分钟,并如上所述用10mM的Alexa Fluor 488叠氮化物检测EdU。

  为了量化在RNAiknockdowns(核糖核酸)中EdU1与总的DAPI1核的比例,将8只雄性寄生虫如上进行处理,并在Zeiss (蔡司公司)LSM710(Plan-Apochromat20x/0.8)显微镜上摄取EdU1和DAPI1核标记的平铺图像。EdU1和DAPI1核的数目用基于图像的核计数核(ITCN)工具用于图像J35的插件而量化。

  C-照射和转录特征识别(基因表现)。从小鼠身上收集寄生虫(d43感染后),悬浮于Basch medium 169(一种媒质)中,并用采用钴60源的Gammacell-220 Excel(Nordion公司产品)暴露于200戈瑞的c-照射下。对照组寄生虫受到模拟照射。寄生虫在Basch medium 169中培养,在照射48小时后,用乙基3 -氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸盐将雄性寄生虫与雌性寄生虫分开。

  

  将这些组织碎片在室温情况下置于摇动槽/摇移器中,用4毫升的解离溶液孵育45–60分钟,并用吸管轻柔地将大的组织碎片破裂。用两组细胞过滤器(100和40毫米,BD)过滤该混合物并通过离心法(5分钟250克)收集解离细胞。将颗粒细胞置于4%的甲醛PBS(磷酸盐缓冲液?)溶液中30分钟,滴到(Fisher Scientific公司的)Superfrost Plus显微镜载物片上,用PBSTx浸透30分钟,并如上述用10毫摩尔的Alexa氟石488叠氮化物检测EdU。

  C辐照和转录谱。从小鼠身上采集了寄生虫(感染后的d43),悬挂在Basch 169介质中,并用带Co60源(Nordion)的Gammacell-220 Excel将其暴露到200 Gy C辐照中。对控制寄生虫进行了模拟辐照。用Basch 169介质培养了寄生虫,并于照射48小时后用乙烷基3-氨基苯甲酸乙酯甲烷磺酸盐将雄性寄生虫与雌性寄生虫分开/分离。

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